DIAGNOSTIKA BREJOSTI
Določanje beljakovinskega markerja za brejost v mleku
DG lait/Milk ELISA test se uporablja za zgodnjo diagnostiko brejosti. Test temelji na kvantitativnem določanju beljakovinskega markerja. Občutljivost testa (verjetnost, da bo test pozitiven pri brejih kravah) je 99,6%. Specifičnost test (verjetnost, da bo test negativen pri kravah, ki niso breje je 99,1%. Test omogoča zanesljivo zgodnjo diagnostiko brejosti in zmanjšanje poporodnega premora oz. dobe med telitvama ter posledično učinkovitejšo prirejo mleka.
Princip testa
Beljakovinski marker za brejost se določa s pomočjo encimsko-imunskega testa ELISA. Vzorci se vnesejo v posodice, ki so prevlečene s specifičnimi protitelesi. Po večkratni inkubaciji s specifičnimi reagenti, ki omogočajo detekcijo beljakovinskega markerja, se rezultati preberejo z ELISA bralcem. Rezultati se preberejo iz umeritvene krivulje standardov, ki je pripravljena po principu enostavne linearne regresije. Inkubacijski čas znaša 3 ure 30 minut. Izvedba celotne analize s pripravo in z vnosom podatkov pa traja približno 5 ur.
Spiranje plošče Razvoj barve po dodatku stopa za razvoj rumene barve.
Vzorčenje
Za uspešno diagnostiko brejosti z DG lait/Milk ELISA testom je izjemno pomembno, da vzorci mleka primerni za preiskavo.
Interpretacija rezultatov
Nepravilni rezultati so predvsem posledica neustreznih vzorcev (glej poglavje Vzorčenje) in embrionalne smrtnosti. Rezultate poročamo v enotah proteinov za posamezno kravo oziroma pozitivno (+) za krave ki so breje in negativno (-) za krave, ki niso breje. Za izboljšanje zanesljivosti zgodnje diagnostike brejosti je priporočljivo, da se preiskava ponovi na 60. – 90. dan brejosti ali kasneje. Ponovna preiskava je priporočljiva predvsem pri pozitivnih rezultatih med 350 – 750 (oznaka '*'). Preiskavo lahko ponovimo že po 2 tednih.
Odčitavanje s spektrofotometrom BioTek 800T.
Označevanje vzorcev
Vzorci mleka za diagnostiko brejosti morajo biti ustrezno označeni z identifikacijo številke krave, lahko tudi ime ali številka ovratnice. Vzorce iz terena mora spremljati izpolnjen obrazec MLAB2006, izdaja 7, ki ga dobite v laboratoriju, z vsemi potrebnimi podatki. Tak postopek oddaje vzorcev mora izpolniti tudi kontrolor in obrazec priložiti v škatlo z vzorci.
Preiskava se predvidoma izvaja večkrat tedensko, odvisno od števila prispelih vzorcev. Pridržujemo si pravico do spremembe termina izvedbe preiskave zaradi premajhnega števila vzorcev in nepredvidenih ali izrednih okoliščin.
Pripravili: dr. Andrej Toplak, univ.dipl.inž.zoot., dr.vet.med., Saška Hodnik univ.dipl.kem in Sara Rihtar, mag.inž.kem tehn.